تریپسینیزاسیون فرآیند تفکیک سلولی با استفاده از تریپسین، آنزیم پروتئولیتیک است که پروتئین ها را تجزیه می کند تا سلول های چسبنده را از ظرفی که در آن کشت می شوند جدا کند. وقتی تریپسین به کشت سلولی اضافه می‌شود، پروتئین‌هایی را تجزیه می‌کند که سلولها را قادر می‌سازد به رگ بچسبند.
چرا سلول ها را تریپسین می کنیم؟
تریپسینیزاسیون اغلب انجام می شود تا اجازه عبور سلول ها به ظرف جدید، مشاهده برای آزمایش، یا کاهش درجه تلاقی در فلاسک با حذف درصدی از سلول ها.
چگونه تریپسین برای جدا کردن سلول ها عمل می کند؟
Trypsin/EDTA یک روش ترکیبی برای جداسازی سلول ها است. تریپسین پروتئین های چسبنده را در برهمکنش های سلول-سلول و سلول-ماتریس با برش اسید آمینه پروتئین های چسبنده به طور خاص در لیزین یا آگینین در ترمینال C در صورتی که اسید آمینه بالادستپرولین نباشد، قطع می کند.
چگونه سلول های چسبنده تریپسینیزه شده را دریافت می کنید؟
رویه
- محیط را با آسپیراسیون از ظرف کشت خارج کنید و تک لایه را با محلول نمکی عاری از Ca2+ و Mg بشویید. 2+ برای حذف تمام آثار سرم. …
- محلول تریپسین یا تریپسین/EDTA کافی را در ظرف(های) کشت توزیع کنید تا تک لایه سلولها را کاملاً بپوشاند و به مدت 2 دقیقه در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد قرار دهید.
چگونه تریپسین را در کشت سلولی غیرفعال کنم؟
وقتی سلولها جدا شدند، ۲ جلد اضافه کنیداز محیط های رشد کامل از قبل گرم شده برای غیرفعال کردن تریپسین. برای اطمینان از بازیابی >95 درصد از سلول ها، محیط را به آرامی با پیپت کردن چندین بار روی سطح لایه سلولی پخش کنید. برای کشت های بدون سرم، مهارکننده تریپسین سویا (محصول شماره
