وقتی سلول‌ها جدا شدند، ۲ جلد محیط رشد کامل از قبل گرم شده اضافه کنید تا تریپسین غیرفعال شود. برای اطمینان از بازیابی >95 درصد از سلول ها، محیط را به آرامی با پیپت کردن چندین بار روی سطح لایه سلولی پخش کنید.
چگونه فعالیت تریپسین را متوقف کنم؟
هضم تریپسین را می توان با انجماد یا با کاهش pH واکنش زیر pH 4 با افزودن اسید فرمیک، استیک یا تری فلوئورواستیک متوقف کرد (تریپسین وقتی فعالیت خود را دوباره به دست می آورد. PH بالاتر از pH 4 است). نمونه های هضم شده را می توان در -20 درجه سانتی گراد نگهداری کرد.
چه چیزی تریپسین را خنثی می کند؟
بافر حاوی یون های کلسیم و منیزیم نیز فعالیت تریپسین را کاهش می دهد. با این حال FBS راه موثرتری برای مهار فعالیت تریپسین است.
آیا سرم تریپسین را غیرفعال می کند؟
سرم تریپسین باقیمانده را از هضم آنزیمی کلیه ها و آنزیم های پروتئولیتیکی که متعاقباً توسط سلول ها سنتز می شوند، غیرفعال می کند. سلول‌های تازه تریپسینیزه شده را می‌توان در غیاب سرم به تک‌لایه‌ها تبدیل کرد، مشروط بر اینکه به طور مکرر شسته شوند تا تریپسین باقیمانده حذف شوند.
چقدر رسانه برای غیرفعال کردن تریپسین لازم است؟
تا زمانی که از حداقل نسبت 1:1 از محیط حاوی 5-10% سرمبا تریپسین خود استفاده می کنید، باید بیش از حد کافی مهار شود و سپس سانتریفیوژ شود. و تبادل متوسط با رسانه تازه.
